Pornostar

Den nakna äggstocken

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

kvinnor stora naturliga bröst
äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

äggstocken den nakna

För att tydliggöra flerstegsprocess för peritoneal spridning av äggstockskarcinom, den aktuella studien presenteras en murin experimentell modell av ursprunglig tumörutveckling och peritoneal metastas via orthotopic inokulering med dessa tumörceller. Äggstockscancer EOC är associerad med en dålig prognos eftersom det visar peritoneal spridning.

För att förbättra prognosen, är det viktigt att kontrollera peritoneal spridning. Det är dock fortfarande oklart hur tumörceller lossnar från primära skador och fäster mesothelium.

Behövs inrättandet av en lämplig djurmodell för att få en förståelse av mekanismen för peritoneal spridning in vivo. I den aktuella studien, introducerar vi processen från den lokala injektionen av EOC celler in i murina äggstocksytan till utvecklingen av metastaser, inklusive bukhinnan och avlägsna organ. Den föreslagna metoden är en less ingrepp för musen och minimerar skador på äggstockarna.

Här beskriver vi de metodologiska steg i utvecklingen av den ursprungliga och metastatisk tumörbildning i EOC. Äggstockscancer EOC står för den högsta cancerrelaterad dödlighet bland gynekologiska maligniteter 1. EOC är förknippad med en dålig prognos, främst på grund av dess sena symtom, och förknippas ofta med flera intraperitoneala spridande av resultat och fjärrmetastaser Peritoneal spridning är en flerstegsprocess.

För det första, tumörceller lossnar från primära skador, och migrera in i bukhålan. När tumörcellerna fäster vid peritoneal mesothelium, de börjar att invadera vävnader genom mesothelium 5,6. För att bättre förstå tumörbiologi t. En xenograft med humana cancerceller är allmänt används för musmodeller i vilka humancancerceller är inokulerade subkutant, intraperitonealt, intravenöst, och ortotopiskt.

En djurmodell med en ortotopiskt ghopskjuten tumör kan mer effektivt och exakt generera resultat som återspeglar tumörmiljön hos människor i jämförelse med en djurmodell med en heterotopiskt ympad tumör.

Därför, för många humana tumörer, orthotopic transplantation modeller har fastställts Här beskriver vi den orthotopic inympning av humana EOC-celler genom en retroperitoneal tillvägagångssätt från den dorsala flanken, som har begränsade invasivitet jämfört med ventrala inokulering.

Denna teknik kan ge en mängd användbar information om EOC, särskilt mekanismen för intraperitoneal spridning. Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian. Behandlingsprotokollet följer riktlinjerna för djurförsök som antogs av Nagoya University.

OBS: Kirurgi kräver inte en dedikerad svit. Kirurgi kan utföras på en laboratorie benchtop i ett område av rummet som är separat och har minimal aktivitet. Ett laminärt huv också kan användas. Sterila kirurgiska instrument måste användas och sax bör inte användas för att göra hud snitt.

OBS: Tumören kommer att bildas på de injicerade äggstocks 2 - 3 veckor efter ympning. Sex nakna möss hade deras äggstockar inokulerades med den humana tydlig cellcancer-cellinjen ES-2, såsom beskrivs i detta protokoll. Såsom visas i figur 1 A, efter 2 veckor, 5 av de 6 mössen hade en tumör i äggstockarna inokulerades med ESceller, men det fanns ingen tumör i den kontralaterala ovarier utan ympning används som en kontroll. Dessutom två av de 5 möss visade flera peritoneala spridande av resultat med ascites.

Celler metastasera till levern Figur 1B. Äggstockarna, både med tumörmassan vid ympning platsen och på kontrollsidan, dissekerades, snittades, färgades med hematoxylin-eosin HE , och analyseras i mikroskop Figur 2. Ett stort antal ovariala cancerceller observerades i den inokulerade äggstock, men inte på den kontralaterala sidan.

Den cellmorfologin var densamma som den hos den parentala tumören. Efter 2 veckor, var musen offrades för obduktion. B, Celler metastasera till levern såsom visas med pilarna. Klicka här för att se en större version av denna siffra. Liknande färgning sågs jämfört med den för klarcellscanceri ovarierna hos människa. C och D, HE-färgning av äggstocken utan inokulering som en kontroll.

Skala barer, m A, C , 20 m B, D. Djurmodeller är viktigt att analysera mekanismerna för tumörutveckling, progression, metastas, och läkemedelseffektivitet mot cancerceller. Möss som bär humana ovariala cancerceller har också använts som en djurmodell. Här beskriver vi ett mindre invasivt förfarande för administrering av äggstockstumörceller vid ett orthotopic plats.

Med hjälp av detta förfarande, ympning i äggstocken via en retroperitoneal strategi från rygg flanken erbjuder betydande fördelar jämfört med andra vanliga tekniker. För det första kan orthotopic ympning ge mer effektiva och tillförlitliga resultat som återspeglar tumörmiljön hos människor 13, Därför är detta retroperitoneal tillvägagångssätt mindre invasiv för möss.

För det tredje är den murina äggstock mycket liten, och så det går inte att ta emot en stor mängd av reaherrar. Man undviker också läckage av ympade celler från äggstockarna. Även ytterligare forskning är nödvändig, kan den beskrivna murina orthotopic ympning vara en användbar metod för att hjälpa till att utveckla nya terapier för behandling av EOC i framtiden.

Det finns två viktiga punkter i detta protokoll. För det första är cellerna som används i den logaritmiska tillväxtfasen. Det andra är de celler suspenderade med ECM-baserad hydrogel placerades på is fram till användning. När ECM-baserad hydrogel börjar värma, kommer gelatineringsprocessen börjar. Det finns en begränsning av denna teknik. Injektionsvolym av cellsuspensionen är mindre än 3 j, l, eftersom musen äggstocken inte kan acceptera en stor volym av inokulat.

Detta protokoll kan ändras på vissa punkter. Om ett in vivo-avbildningssystem är tillgänglig, celler som bär enzymer som producerar bioluminescens t. GFP kan användas i detta protokoll.

Denna modifierade protokoll kommer att ge användbar information för dynamiken i spridningen av cancerceller från den primära tumören. Dessutom använder detta protokoll ESceller för ympning med mus äggstock. ESceller är härledda från klar cellscancer, och denna cellinje uppvisar aggressiva tillväxt i nakna möss.

Andra cellinjer t. Författarna tackar medlemmarna i avdelningen för obstetrik och gynekologi och cancerbiologi för deras hjälpsamma diskussioner och tekniskt stöd. Koya, Y. To learn more about our GDPR policies click here. If you want more info regarding data storage, please contact gdpr jove. Thank you for your interest in JoVE. We will get back to you as soon as we can, so please stay tuned. If you need immediate assistance, please email us at support jove.

Your access has now expired. Provide feedback to your librarian. If you have any questions, please do not hesitate to reach out to our customer success team.

Login processing Log in or Start trial to access full content. Framställning av cellsuspensioner Human äggstocks klar cellscancer cellinje. Undersök cellerna under mikroskop för att säkerställa att cellerna lösgörs från ytan av cellodlingskärlet och flytande.

Lägg färsk serum innehållande odlingsmedium för att inaktivera trypsin 5 ml per 25 cm 2 , och återsuspendera cellerna. Överför resuspenderas celler till en 15 ml koniska rör. Centrifugera vid xg under 5 min. Utföra centrifugering antingen vid 4 ° C eller rumstemperatur. Försiktigt bort supernatanten och återsuspendera cellerna med odlingsmedium 5 ml per 25 cm 2.

Räkna celler t. Sätta de suspenderade cellerna på is. Tina frysta extracellulära matrisen ECM -baserade hydrogelpartiklar alikvoter i ett isbad. Placera de preparerade cellsuspensioner i ett isbad tills användning. Kontrollera anestesidjups genom att verifiera bristande uttag på fast tå nypa. Efter musen bedövas, tillämpa en intetsägande steril oftalmisk salva till ögonen för att förhindra uttorkning vid behov.

Placera sövda musen på ett operating scenen magen sidan nedåt. Desinfektera operationsområdet flera gånger med både alkohol och en jod-baserade eller klorhexidin-baserade skrubba. Gör en ~ 2 cm snitt vertikalt nära ryggraden mellan höger kust båge och lårbenet. Använda en steril kirurgisk duk runt snittstället. Fäst uppskurna hudytor med klämmor för att hålla öppningen. Notera: Upprullningsdon kan användas i stället för klämmor. Därefter gör en andra snitt ca 1 cm på parietala peritoneum under första snittet för att öppna bukhålan.

Kläm fast anskäras buken ytor. Kläm fast fettvävnaden som omger den ipsilaterala äggstocken och äggledaren med en klämma för att ta bort äggstockarna från bukhålan. Placera försiktigt äggstocken och äggledaren på gasväv. Sedan placera musen magen sidan nedåt under dissekera mikroskop. Noggrant injicera den framställda cellsuspensionen 1- 2 j, l in i äggstocken.

4 Comment

  • Övervaka mössen dagligen under 3 - 7 dagar efter kirurgisk behandling. Detta protokoll kan ändras på vissa punkter. Cite this Article Koya, Y. En del behöver inte stimulera fittan för att få utlösning, det räcker med att fantisera och bli upphetsad. Äggstockscancer EOC är associerad med en dålig prognos eftersom det visar peritoneal spridning. Mellangården Mellan blygdläpparna och anus finns ett hårlöst område som är väldigt känsligt. Det finns en begränsning av denna teknik.
  • När ECM-baserad hydrogel börjar värma, kommer gelatineringsprocessen börjar. Den ena ger signaler om när du är bajsnödig och den andra hjälper till att styra bajset så att det inte bara kommer av sig självt. Andra cellinjer t. En del tycker att det är skönt att stimulera anus och området runt omkring. Du kan också bli våt när du sover och drömmer. Det är det som brukar kallas mens.

Leave a Comment

Privacy Settings
We use cookies to enhance your experience while using our website. If you are using our Services via a browser you can restrict, block or remove cookies through your web browser settings. We also use content and scripts from third parties that may use tracking technologies. You can selectively provide your consent below to allow such third party embeds. For complete information about the cookies we use, data we collect and how we process them, please check our Privacy Policy
Youtube
Consent to display content from Youtube
Vimeo
Consent to display content from Vimeo
Google Maps
Consent to display content from Google