Anal

Taylor regen anal

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

kvinnor stora naturliga bröst
anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

anal taylor regen

Fri-lösning kapillärelektrofores CE separerar analyter, vanligen laddade föreningar i lösning genom tillämpning av ett elektriskt fält. Jämfört med andra analytiska separationstekniker, såsom kromatografi, är CE billig, robust och kräver ingen provberedning för ett antal komplexa naturliga matriser eller polymera prover på ett effektivt sätt.

CE är snabb och kan användas för att följa utvecklingen av blandningar i realtid t ex kemisk reaktionskinetik , eftersom signalerna som observeras för de separerade föreningarna är direkt proportionella mot mängden av dessa i lösning.

Här, är effektiviteten hos CE visats för att övervaka den kovalenta ympningen av peptider på kitosan-filmer för efterföljande biomedicinska tillämpningar. Kitosan s antimikrobiella och biokompatibla egenskaper gör den till ett attraktivt material för biomedicinska tillämpningar, såsom celltillväxtsubstrat. Kovalent ympning peptid RGDS arginin - glycin -asparaginsyra - serin på ytan av kitosan filmer syftar till att förbättra cellvidhäftning.

Historiskt, kromatografi och aminosyraanalys har använts för att tillhandahålla en direkt mätning av mängden ympad peptid. Men gör lika exakt men realtidsövervakning av peptiden ympning processen snabb separation och frånvaro av provberedning från CE. CE är i stånd att separera och kvantifiera de olika komponenterna i reaktionsblandningen: den icke-ympade peptiden och de kemiska kopplingsmedel. På detta sätt användningen av CE resulterar i förbättrade filmer för tillämpningar nedströms. Kitosan filmer karaktäriserades genom solid-state NMR kärnmagnetisk resonans spektroskopi.

Denna teknik är mer tidskrävande och kan inte tillämpas i realtid, men ger en direkt mätning av peptiden och sålunda validerar CE teknik. Fri lösning kapillärelektrofores CE är en teknik som separerar föreningar i lösningar baserade på deras laddning till friktionsförhållande 1,2. Charge-till-storleksförhållande nämns ofta i litteraturen, men denna förenkling gäller inte polyelektrolyter, inklusive polypeptider i detta arbete, och också visat sig inte vara lämpligt för små organiska molekyler 3.

CE skiljer sig från andra separationstekniker i det att den inte har en stationär fas, endast en bakgrunds elektrolyt vanligen en buffert. Detta gör det möjligt för tekniken att vara robust i sin förmåga att analysera ett stort antal prover med komplexa matriser 4 såsom växtfibrer 5, jäsning brygger 6 ympning på syntetiska polymerer 7, matprov 8, och knappast lösliga peptider 9 utan tråkiga provberedning och rening.

Detta är särskilt betydelsefullt för komplexa polyelektrolyter som har upplösningsfrågor sUCH som kitosan 10 och gellangummi 11 och föreligger därför som aggregerat eller utfällt i lösning och har framgångsrikt analyseras utan provfiltrering. Vidare analys av socker i frukostflingor involverade injicera prov med partiklar av frukostflingor prover fälldes i vatten 8. Detta omfattar även en analys av grenade polyelektrolyter eller sampolymerer 12, Ett omfattande arbete har också genomförts för att utveckla CE tekniker speciellt för analys av proteiner för proteomik 14, kirala separation av naturliga eller syntetiska peptider 15 och mikrochip separationer av proteiner och peptider Eftersom separation och analys sker i en kapillär, är endast små volymer av prov och lösningsmedel användas som medger CE för att ha en lägre löpande kostnad än andra separationstekniker inkluderande kromatografi 5,6, Eftersom separationen av CE är snabb, tillåter den monitoring av reaktionskinetik.

Detta visades i fallet med ympning av peptider på kitosan filmer för förbättrad celladhesion Kitosan är en polysackarid härledd från N -deacetylation av kitin. Kitosan filmer kan användas för olika biomedicinska tillämpningar såsom bioadhesiva 19 och celltillväxtsubstrat 18,20, på grund av chitosan s biokompatibilitet Cellbindning till specifika extracellulära matrixproteiner, såsom fibronektin, kollagener och laminin, är direkt kopplat till överlevnad av cellerna Notably, olika celltyper kräver ofta fastsättning på olika extracellulära matrisproteiner för överlevnad och riktig funktion.

Cellbindning till kitosan filmer visades förbättras genom ympning av fibronektin 23; dock, är förberedelse, rening och ympning av sådana stora proteiner inte är ekonomiskt lönsamt.

Växelvis ett område av små peptider have visats kunna efterlikna egenskaperna för stora extracellulära matrisproteiner.

Till exempel, peptider såsom de fibronektin mimetika RGD arginin - glycin - asparaginsyra och RGDS arginin - glycin - asparaginsyra - serin har använts för att underlätta och öka cellvidhäftning Kovalent ympning av RGDS på kitosan filmer resulterade i förbättrad cell fäste för celler är kända för att binda till fibronektin in vivo Ersätta större proteiner gillar fibronektin med mindre peptider som har samma funktion ger en betydande kostnadsminskning.

Här var peptid ympning till kitosan utförs som tidigare publicerats Såsom tidigare visats, ger detta tillvägagångssätt enkel och effektiv ympning med hjälp av kopplingsmedel EDC-HCl 1-etyl 3-dimetylaminopropyl karbodiimid och NHS N-hydroxisuccinimid att funktionalisera karboxylsyran av RGDS att vara ympas påkitosanfilm.

Två fördelar med denna ympning metod är att den inte kräver någon ändring av kitosan eller peptiden, och det genomförs i vattenmedium för att maximera kompatibilitet med framtida cellodlingstillämpningar 18, Som kopplingsmedel och peptiden kan laddas, är CE en lämplig metod för analys av reaktionskinetiken.

Viktigt är analys av reaktionskinetik via CE möjliggör realtidsövervakning av ympningsreaktionen och möjliggör både optimering och kvantifiera graden av ympning därmed. Medan det inte rutinmässigt är nödvändigt kan resultaten av CE-analys valideras off-line genom en direkt mätning av peptiden ympning på de chitosaninnehållande filmer med användning av solid-state NMR kärnmagnetisk resonans spektroskopi 25,26 för att demonstrera den kovalenta ympningen av peptiden på filmen Men jämfört med solid-state NMR-spektroskopi, realtidsanalys som tillhandahålls avCE möjliggör kvantifiering av peptiden konsumtionen i realtid och därmed förmåga att bedöma kinetiken för reaktionen.

Ovannämnda metod är enkel och möjliggör realtidsanalys av peptid ympning på kitosan filmer med indirekt kvantifiering av omfattningen av ympning. Den visade metoden kan utvidgas till realtid kvantitativ bedömning av olika kemiska reaktioner så länge reaktanterna eller produkterna som skall analyseras kan laddas.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian. CE är väl lämpad för övervakning av ympning av peptider t. RGDS på kitosan-filmer. CE är i stånd att separera de olika molekyler av intresse från reaktionsmediet. Efter toppvärden fick reaktionsmediet injiceras och de olika reaktionskomponenterna identifierades Figur 2.

Kitosan är närvarande i ympning experiment i form av olösliga filmer och därför inte injiceras eller observerats i CE. Notera att för alla rådata, than in migration tidsaxeln omvandlas till en elektroforetisk rörlighet axel Ekvation 1 och UV-absorbansen axeln i en fördelning av elektroforetiska rörlig W μ ekvation 2. Som de alikvoter tas från reaktionsmediet de placeras in i CE instrumentet och injiceras.

Det är viktigt att notera att det inte finns någon signal som kan tilldelas till en produkt från en sidoreaktion av peptiden, på så sätt att det förutsätts att de RGDS avlägsnas från reaktionsmediet håller på att ympas på kitosanfilm. Överlagrade elektroferogram figur 3a tillåter kvantifiering av peptidförbrukning från början till slutet av reaktionen. Det skall noteras attäven om kinetiken ades initialt under 18 timmar figur 3B , var 4 h, anses tillräckligt för att reaktionen skall fortsätta till dess maximala utsträckning.

För att möjliggöra kvantifiering en optimal injektionsvolym krävs för att säkerställa den signal-brusförhållande är tillräckligt hög samtidigt förhindra överbelastning Figur 4A och i fråga om RGDS var injektioner måste fyllas i realtid för att förhindra polykondensation Figur 4B. CE-baserad teknik som beskrivs här för att analysera peptid ympning till kitosan filmer är snabb och enkel; Men det inte kvantifiera ympning processen direkt. NMR-spektroskopi användes för att demonstrera ympning; denna mätning kan inte göras i realtid det tar vanligen flera timmar och måste slutföras efterreaktion.

Den kvalitativa jämförelse av kitosan filmer före och efter ympning visar lyckad ympning av peptiderna through uppträdandet av en signal vid 70 ppm i de ympade filmerna motsvarar amidbindningen mellan kitosan och peptiden figur 5. Figur 1. Scheme of ympningsreaktionen. Klicka här för att se en större version av denna siffra. Figur 2. Peak tilldelning av de arter som förekommer i reaktionsmediet. Figur 3. A överlagras peptid toppar vid reaktionstiden 30 minuter lila heldragen linje , 60 min magenta streckad linje , 90 min blå heldragen linje , min grön streckad linje , min röd heldragen linje och B kinetik ympning genomfört över 18 timmar i replikat kvadrat och cirkel.

Figur 4. B reaktionsmedier kvar i en CE flaska under en längre tid innan injektion. Figur 5. Jämförelse av filmer före svart linje och efter blå linje peptid ympning. Signaler, som före endast i spektrumet registreras efter ympning anges med asterisker. Enkelheten i protokollet som beskrivs här gör det idealiskt för utbredd tillämpning. Dock måste särskild uppmärksamhet ägnas åt följande viktiga steg. Det är viktigt att separera en känd standard omedelbart före separationen av okända prov såväl som vid slutet av en serie av separationer för att kontrollera giltigheten av kapillären och instrumentet på dagen.

Denna standard kan vara en oligoacrylate 27 eller vilket prov som helst känt för att ge multipla toppar över ett brett område av migrationstider. Övervakning av strömmen under alla separationer och analysera migrering av en neutral markör i varje separation är viktiga åtgärder för att identifiera problem. Om den följs av en fördröjd migration tid av den neutrala kokare det kan också bero på kapillären inte vara tillräckligt ren.

Under experimentet kan extra reningssteg användas för att säkerställa en optimal separation, typiskt innefattande eller förlänga en flush med koncentrerad vattenlösning av natriumhydroxid för att regenerera säkrings kvarts kapillär yta. Vid avslutningen av experimentet, är väsentligt lämplig behandling av rådata då man jämför resultaten. Detta involverar omvandling av X och Y-axeln som erhållits från CE instrumentet steg 8,3.

Migrerings tider som bestäms i CE har en relativt dålig repeterbarhet och vi rekommenderar att du använder elektroforetiska rörlig istället, vilket leder till en mycket bättre repeterbarhet.

Betydelsen av korrekt t reating data har visats tidigare med separationen och karakteriseringen av kitosan 10, poly akrylsyra 29, segmentsampolymerer 13 och detekteringen av sockerarter i frukostflingor 8 genom mindre standardavvikelser RSD observeras mellan experiment för mobiliteter än för migrationstider.

Andra steg för optimering kan innefatta justering av injektionsvolym tidpunkten för injektion för att tillåta separation med god känslighet utan att orsaka överbelastning som skulle förhindra kvantifiering. En insprutningstiden av 10 sek anses optimal vid 30 mbar Figur 4B : en kortare insprutningstid leder till en minskad känslighet medan längre insprutningstider leder till en topp form distorsion indikativ för kapillär överbelastning.

I fallet med ympning av peptid RGDS Onto kitosan, eller på ett annat substrat , är peptiden förmåga att reagera med sig själv för att producera linjära oligomerer eller grenade strukturer genom polykondensation Detta beror på att RGDS innehåller både amin och karboxylsyragrupper funktionella grupper. Dessa peptid oligomerer har inte samma electrophoretic rörlighet som de initiala peptid RGDS och kan därför orsaka en felaktig kvantifiering, till exempel genom samarbete migration med andra arter.

Det är därför viktigt att se till att alikvoter av reaktionsmediet injiceras och separeras inom några minuter efter att tas från reaktionsmediet Figur 4B. När specifikt arbetar med kitosan filmer finns ett antal åtgärder för att ansluta sig till. Under produktionen av de kitosan filmer, filmerna måste lämnas att torka under minst 7 dagar företrädesvis mer. Om detta inte är slutförd, när filmerna placeras i PBS-buffert för att skölja de kommer att lösas upp i stället för att bilda en svälld film som sedan förhindrar nästa steg.

Dessutom är det viktigt att neutralisera filmen före ympningsreaktionen för att avlägsna eventuell kvarvarande ättiksyra, som kan lakas ut av filmen och konkurrera medpeptiden för ympningsreaktionen Detta kan göras genom blötläggning i en utspädd vattenlösning av natriumhydroxid eller i PBS. PH för den buffert som används som lösningsmedel för ympningsreaktionen är också kritisk: om det är för sur filmerna kommer delvis eller helt lösas upp. Under ympningsreaktionen är det viktigt att filmen är i stånd att ha maximal kontakt med reaktionslösningen.

Därför är den petriskål med filmerna och reaktionsblandningen placerades på en skakanordning. Det är också absolut nödvändigt att förhindra avdunstning av reaktionsblandningen för att förhindra okontrollerade koncentrationsvariationer som resulterar i felaktiga kvantifieringar; användningen av paraffinfilm för att täcka petriskål var effektivt för att förhindra det.

Den största begränsningen av CE-tekniken är att individuellt det inte kan bekräfta ympning processen. I samband med den kemiska ympningsprocessen nämnts ovan är kvantifiering av peptiden ympning indirekt. Dettakan övervinnas med hjälp av en kompletterande teknik såsom solid-state NMR-spektroskopi, såsom tidigare nämnts.

Andra begränsningar för CE-teknik är att den kräver föreningen av intresse att debiteras.

3 Comment

  • Black store dick. Find more xxx, andra, pradesh, videos, sex, solo, masturbate, nxx videos andra cc camera sex videos sx andra dog sx videos downlod. När specifikt arbetar med kitosan filmer finns ett antal åtgärder för att ansluta sig till. Den kvalitativa jämförelse av kitosan filmer före och efter ympning visar lyckad ympning av peptiderna through uppträdandet av en signal vid 70 ppm i de ympade filmerna motsvarar amidbindningen mellan kitosan och peptiden figur 5. Enkelheten i protokollet som beskrivs här gör det idealiskt för utbredd tillämpning. This Partnership will give us Hundreds of Millions of Dollars as profit. Jämförelse av filmer före svart linje och efter blå linje peptid ympning.

Leave a Comment

Privacy Settings
We use cookies to enhance your experience while using our website. If you are using our Services via a browser you can restrict, block or remove cookies through your web browser settings. We also use content and scripts from third parties that may use tracking technologies. You can selectively provide your consent below to allow such third party embeds. For complete information about the cookies we use, data we collect and how we process them, please check our Privacy Policy
Youtube
Consent to display content from Youtube
Vimeo
Consent to display content from Vimeo
Google Maps
Consent to display content from Google